Gelfree 8100 微量蛋白質(zhì)制備系統(tǒng)
隨著生物質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展，蛋白質(zhì)和多肽分析的分辨率、靈敏度、準確性、鑒定能力大為提高。尤其是Top-down蛋白質(zhì)鑒定方法大量使用后，傳統(tǒng)的一維、二維電泳或液相色譜等樣品制備技術(shù)已經(jīng)不能滿足需要。分析前如何降低樣品的復(fù)雜程度、獲得完整蛋白質(zhì)、富集低豐度蛋白質(zhì)、降低高豐度蛋白質(zhì)對低豐度蛋白質(zhì)的干擾、保留蛋白質(zhì)的各種翻譯后修飾狀態(tài)、提高樣品處理通量等，已成為蛋白質(zhì)樣品制備方法的重要前提。 英國Expedeon公司推出了一套新型的蛋白制備電泳儀— Gelfree 8100 Fractionation System。該系統(tǒng)使用凝膠洗脫液相組分截留電泳技術(shù)(gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis，GELFREE)，基于蛋白質(zhì)分子量的不同，對完整蛋白質(zhì)進行分組，使用移液器在液相中回收蛋白質(zhì)。該系統(tǒng)能在短時間內(nèi)同時處理8個樣品。在3.5kDa—500kDa范圍內(nèi)，相對于其它傳統(tǒng)分組方法，具有上樣量大、重現(xiàn)性好、分辨率高、回收率高、分離速度快和操作簡單的優(yōu)點。能增大蛋白質(zhì)組分析的覆蓋范圍，改善后期質(zhì)譜分析的結(jié)果，提高蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果的可信度。 特點及應(yīng)用 基于分子量的不同對完整蛋白質(zhì)進行分離純化，收集; 蛋白質(zhì)樣品在液相中回收，避免了傳統(tǒng)一維、二維電泳后的染色和條帶或點位切割步驟; 蛋白質(zhì)分離范圍高達3.5kDa—500kDa; 8個分組通道，滿足高通量樣品處理的要求，每個通道*多可將樣品分為30個組分; 用戶可根據(jù)需要自行設(shè)置蛋白質(zhì)分組程序，分離純化特定的目標蛋白; 樣品容量大，每個通道蛋白質(zhì)上樣量*高可達1mg，是普通一維電泳的5倍以上，有利于富集低豐度蛋白質(zhì); 回收率高，>80%; 重現(xiàn)性好，CV<15%; 分離過程不受蛋白質(zhì)疏水性或等電點的影響,這就意味著你幾乎覆蓋整個蛋白質(zhì)組。 簡化蛋白質(zhì)組成的復(fù)雜程度，縮小復(fù)雜蛋白質(zhì)樣品的動態(tài)范圍，便于使用LC-MS/MS進行Bottom-Up蛋白質(zhì)組學(xué)研究; 蛋白質(zhì)回收后保留其完整性，便于進行Top-Down蛋白質(zhì)組學(xué)研究，分析翻譯后修飾、蛋白質(zhì)異構(gòu)體、氨基酸衍生物等; 蛋白質(zhì)回收后在溶液內(nèi)消化，免去了費時的膠內(nèi)消化步驟; 特別適合為LC-MS/MS、MALDI-TOF或**印跡等分析方法制備樣品;
Gelfree 8100蛋白制備電泳儀由主機和8通道電泳槽兩部分構(gòu)成。主機設(shè)計緊湊，能為8個獨立的電泳通道提供電壓,設(shè)置暫停用于收集組分。使用觸摸屏，可以設(shè)置電壓、組分系列和使用的通道數(shù)等參數(shù)，進行寬范圍的組分分析或目標蛋白的富集。運行過程中，觸摸屏實時顯示每個通道電泳狀態(tài)及電壓電流值。 電泳槽由五個部分組成，分別是：陰*緩沖液槽、上樣槽、電泳凝膠管、樣品收集槽、陽*緩沖液槽。電泳凝膠管是內(nèi)裝預(yù)制SDS-PAGE膠的玻璃管。緩沖液槽與上樣槽及收集槽之間由一個截留分子量為3.5kDa的膜分隔開。 電泳槽套盒：
一次性電泳槽套盒含8個獨立通道，可同時或分別使用1—8個通道，處理1—8個樣品，未使用的通道可保存供以后使用。針對不同的需求，提供四種電泳槽套盒供選擇。 Gelfree 8100蛋白制備電泳儀的工作原理：